技术概述

DNA pull down-MS是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上，再与细胞核蛋白孵育，纯化出与DNA片段互作的蛋白，洗涤洗脱得到的蛋白产物，做western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合；做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息（如具体某个或某些转录因子/组蛋白等）。

 
技术原理

生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用；其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后，利用生物素和链霉亲和素之间的亲和作用，可以纯化出各种生物大分子复合物。
       
DNA pull down实验首先针对靶标区域设计DNA探针，探针经过脱硫生物素标记，跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合；细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育，纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体，洗脱得到DNA片段的结合蛋白质。
 

技术应用

目的DNA片段的互作蛋白（如转录因子等）筛选。
 

技术流程      

 
服务信息