DNA怎么裂解？裂解的试剂主要有哪些？
裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA断裂。这几种方法是提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA的断裂.一、机械裂解法主要有以下两种：
1.热休克(Thermalshock)，既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成(freezingandthawing)，。原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20℃冰上进行，解冻可以在37、50、65或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。
2.超声波处理(Ultrasonication)既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好虽然DNA产量较高，但通常得到的DNA片段较小。
。二、化学裂解和酶裂解法(在提核酸时联合使用)主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白变性使其稳定；（4）抑制蛋白酶活性。细胞裂解中常用的试剂有：50mMTris-HClpH7.4(缓冲体系)，150mMNaCl(等渗体系)，1mMPMSF(强大的蛋白酶抑制剂)，1mMEDTA(变性剂和稳定剂)，5µg/mlAprotinin(蛋白酶抑制剂)，5µg/mlLeupeptin(蛋白酶抑制剂)，1%Tritonx-100(破坏细胞)，1%Sodiumdeoxycholate(中度变性剂和蛋白溶解剂)，0.1%SDS(强变性剂和蛋白溶解剂)。7M尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解)，蛋白酶K等.也可以直接在我司购买ScienCell实验室DNA、RNA、原代细胞裂解物等，无需进行繁琐的细胞培养和裂解，到手就可以上实验，做这方面实验的您，会心动吗？
1.热休克(Thermalshock)，既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成(freezingandthawing)，。原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20℃冰上进行，解冻可以在37、50、65或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。
2.超声波处理(Ultrasonication)既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好虽然DNA产量较高，但通常得到的DNA片段较小。
。二、化学裂解和酶裂解法(在提核酸时联合使用)主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白变性使其稳定；（4）抑制蛋白酶活性。细胞裂解中常用的试剂有：50mMTris-HClpH7.4(缓冲体系)，150mMNaCl(等渗体系)，1mMPMSF(强大的蛋白酶抑制剂)，1mMEDTA(变性剂和稳定剂)，5µg/mlAprotinin(蛋白酶抑制剂)，5µg/mlLeupeptin(蛋白酶抑制剂)，1%Tritonx-100(破坏细胞)，1%Sodiumdeoxycholate(中度变性剂和蛋白溶解剂)，0.1%SDS(强变性剂和蛋白溶解剂)。7M尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解)，蛋白酶K等.也可以直接在我司购买ScienCell实验室DNA、RNA、原代细胞裂解物等，无需进行繁琐的细胞培养和裂解，到手就可以上实验，做这方面实验的您，会心动吗？
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