HK-2 人肾皮质近曲小管上皮细胞-上海和序生物科技有限公司

HK-2 人肾皮质近曲小管上皮细胞

更新：2020/6/24 15:05:19 点击：

品牌： HK-2 人肾皮质近曲小管上皮细胞
型号： HX-h096

产品介绍

细胞特性
1）来源：肾皮质/近端小管
2）形态：上皮细胞样，贴壁生长
3）含量：>1x106 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；
（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。
5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。
6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备培养液Keratinocyte-SFM(Invitrogen,17005-042,iCell-0019)或者使用iCell货号：PriMed-iCELL-010来培养细胞。
备注1：K-SFM(Invitrogen,17005-042)培养液包含两个组份：基础培养基1瓶（货号10724-011）+生长因子1管货号（37000-015）
备注2：按照K-SFM培养基说明书，需额外添加Gentamicin Solution。建议使用Gentamicin/Amphotericin Solution 500×（Gibco,R-015-10）。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：完全培养液92.5%，7.5%DMSO，现用现配。
4）传代比例：1:2或1:3
备注：如果没有特别说明，收到细胞后的第一次传代一般是1:2。
传代周期：4-6天
换液频率：每周 2-3次
备注：
1. 该细胞贴壁较慢，为使细胞贴壁更容易，建议可提前在培养皿/培养瓶中铺0.25%的明胶溶液，并于贴壁24~48小时后再进行后续操作。
2. 该细胞生长不能过密，请在生长密度80%时进行传代。
3.使用0.05%胰酶消化细胞，同时由于K-SFM为无血清培养液无法终止胰酶消化，所以消化完成后要通过离心（建议125xg离心5到10分钟）去除胰酶，再进行后续操作。
二、细胞处理
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4-5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶（皿）中培养。
2）细胞传代：该细胞不能等到长满，细胞密度达80%，即要进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.05%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4 . 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议客户冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5

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